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蛋白定量檢測試劑用于測定不同樣本中蛋白質濃度

更新時間:2025-06-20      點擊次數:190
   蛋白定量檢測試劑是用于測定不同樣本中蛋白質濃度的工具,廣泛應用于生物化學、分子生物學、臨床診斷等領域。以下是關于蛋白定量檢測試劑的詳細說明,包括其類型、原理、應用場景及注意事項:
  1. 常見蛋白定量檢測方法
  考馬斯亮藍法(Bradford法):
  原理:考馬斯亮藍染料與蛋白質結合后發生顏色變化,在595 nm處有特征吸收峰,吸光度與蛋白質濃度成正比。
  特點:操作簡便、快速,靈敏度高,但受干擾物質影響較大。
  適用樣本:純化蛋白質、裂解物、血清、血漿等。
  二喹啉甲酸(BCA)法:
  原理:在堿性條件下,蛋白質與Cu2+反應生成Cu1+,后者與BCA試劑形成紫色絡合物,吸光度與蛋白質濃度成正比。
  特點:抗干擾能力強(對去污劑、甘油耐受性較好),靈敏度稍低于Bradford法,但更穩定。
  適用樣本:復雜蛋白質混合物、細胞裂解液、血清/血漿等。
  紫外吸收法(Lowry法):
  原理:蛋白質中的酪氨酸和色氨酸在280 nm處有特征吸收峰,通過吸光度計算蛋白質濃度。
  特點:無需試劑,但受核酸、多肽等干擾,靈敏度較低。
  適用樣本:純化蛋白質、無核酸污染的樣品。
  比濁法(如Peterson法):
  原理:蛋白質在酸性條件下與酚類物質反應生成有色復合物,吸光度與濃度相關。
  特點:靈敏度高,但操作復雜,易受干擾。
  熒光法(如熒光染料標記法):
  原理:熒光染料(如FITC、熒光素)與蛋白質結合后發出熒光,熒光強度與蛋白質濃度相關。
  特點:靈敏度高,適合低濃度蛋白檢測,但需要熒光檢測儀。
  2. 蛋白定量檢測試劑應用場景:
  純化蛋白質定量:
  用于評估蛋白質純化過程中的產量和純度。
  推薦方法:Bradford法或BCA法。
  細胞裂解物定量:
  測定細胞裂解液中的總蛋白質濃度,用于后續電泳、免疫印跡等實驗。
  推薦方法:BCA法(抗去污劑干擾)。
  血清/血漿定量:
  測定血液中的蛋白質濃度,用于臨床診斷或研究。
  推薦方法:BCA法或紫外吸收法。
  復雜蛋白質混合物定量:
  如組織勻漿、體液等復雜樣本中的蛋白質定量。
  推薦方法:BCA法(抗干擾能力強)。
  稀釋系列標準曲線:
  通過已知濃度的標準蛋白質(如BSA)制備標準曲線,計算未知樣本的蛋白質濃度。

 


 
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