一、RNA HS Assay Kit存放條件與注意事項:
1.溫度要求
未開封試劑盒:存放在-20℃,避免反復凍融。
已開封試劑盒:密封后可短期存放于4℃,建議1個月內(nèi)用完,避免活性成分降解。
關鍵組分:若頻繁使用,可分裝后存于-20℃,減少凍融次數(shù)。
2.防潮與避光
試劑盒應遠離潮濕環(huán)境,避免吸濕導致粉末結塊或酶失活。
避光保存熒光染料、底物等光敏成分,可用鋁箔紙包裹試劑盒或存放于暗盒中。
3.防止污染
開封后立即蓋緊管蓋,操作時避免說話、咳嗽等產(chǎn)生氣溶膠污染。
使用前后擦拭操作臺和移液器,建議在超凈工作臺內(nèi)操作。
二、RNA HS Assay Kit使用前準備:
1.試劑檢查
離心確認:開蓋前輕柔離心,確保管壁殘留液體沉底。
溶解沉淀:若試劑因運輸出現(xiàn)結晶,需室溫緩慢溶解并混勻,避免高溫或超聲波破碎。
有效期驗證:檢查試劑瓶標簽上的有效期和批次號,過期或性狀異常的試劑勿用。
2.實驗設計優(yōu)化
設置對照組:每次實驗需包含無模板對照(NTC)、陽性對照(如標準品)和陰性對照(如水替代模板)。
預混Master Mix:提前配制含熒光染料、酶、dNTP等的主混合液,漩渦振蕩混勻后短暫離心,減少分裝誤差。
引物驗證:新引物需通過梯度稀釋測試擴增效率,避免非特異性擴增或引物二聚體干擾。
三、RNA HS Assay Kit操作技巧:
1.加樣規(guī)范
精準移液:使用經(jīng)校準的移液器,加樣時垂直插入液面下,避免氣泡產(chǎn)生。
順序調整:最后加入模板RNA或反轉錄產(chǎn)物,減少交叉污染風險。
預混震蕩:加樣后輕輕拍打管壁混勻,或使用低速渦旋儀。
2.避免RNA降解
冰上操作:全程在冰盒或低溫金屬板上操作,尤其是RNA模板和逆轉錄步驟。
DNase處理:若RNA含痕量DNA,需用無核酸酶的DNase I處理,并徹*去除酶活性。
使用RNA酶抑制劑:在反應體系中添加RNase 抑制劑,尤其在樣本量低時。
3.儀器設置
熒光閾值調整:在指數(shù)擴增期設定閾值,避免過高或過低。
溫度校準:定期檢查PCR儀的溫控準確性。
多通道校正:若使用多通道熒光檢測,需對各通道進行交叉補償校準。