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RNA HS Assay Kit存放與使用技巧

更新時間:2025-04-27      點擊次數(shù):58
  一、RNA HS Assay Kit存放條件與注意事項:
  1.溫度要求
  未開封試劑盒:存放在-20℃,避免反復凍融。
  已開封試劑盒:密封后可短期存放于4℃,建議1個月內(nèi)用完,避免活性成分降解。
  關鍵組分:若頻繁使用,可分裝后存于-20℃,減少凍融次數(shù)。
  2.防潮與避光
  試劑盒應遠離潮濕環(huán)境,避免吸濕導致粉末結塊或酶失活。
  避光保存熒光染料、底物等光敏成分,可用鋁箔紙包裹試劑盒或存放于暗盒中。
  3.防止污染
  開封后立即蓋緊管蓋,操作時避免說話、咳嗽等產(chǎn)生氣溶膠污染。
  使用前后擦拭操作臺和移液器,建議在超凈工作臺內(nèi)操作。
  二、RNA HS Assay Kit使用前準備:
  1.試劑檢查
  離心確認:開蓋前輕柔離心,確保管壁殘留液體沉底。
  溶解沉淀:若試劑因運輸出現(xiàn)結晶,需室溫緩慢溶解并混勻,避免高溫或超聲波破碎。
  有效期驗證:檢查試劑瓶標簽上的有效期和批次號,過期或性狀異常的試劑勿用。
  2.實驗設計優(yōu)化
  設置對照組:每次實驗需包含無模板對照(NTC)、陽性對照(如標準品)和陰性對照(如水替代模板)。
  預混Master Mix:提前配制含熒光染料、酶、dNTP等的主混合液,漩渦振蕩混勻后短暫離心,減少分裝誤差。
  引物驗證:新引物需通過梯度稀釋測試擴增效率,避免非特異性擴增或引物二聚體干擾。
  三、RNA HS Assay Kit操作技巧:
  1.加樣規(guī)范
  精準移液:使用經(jīng)校準的移液器,加樣時垂直插入液面下,避免氣泡產(chǎn)生。
  順序調整:最后加入模板RNA或反轉錄產(chǎn)物,減少交叉污染風險。
  預混震蕩:加樣后輕輕拍打管壁混勻,或使用低速渦旋儀。
  2.避免RNA降解
  冰上操作:全程在冰盒或低溫金屬板上操作,尤其是RNA模板和逆轉錄步驟。
  DNase處理:若RNA含痕量DNA,需用無核酸酶的DNase I處理,并徹*去除酶活性。
  使用RNA酶抑制劑:在反應體系中添加RNase 抑制劑,尤其在樣本量低時。
  3.儀器設置
  熒光閾值調整:在指數(shù)擴增期設定閾值,避免過高或過低。
  溫度校準:定期檢查PCR儀的溫控準確性。
  多通道校正:若使用多通道熒光檢測,需對各通道進行交叉補償校準。
 
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